Faire pousser des cyanobactéries, Fiche labo
Se procurer
Des Oscillatoria ont été récoltées dans une flaque
d’eau résiduelle sur la terre nue derrière un batiment à Roissy en Brie ).
Elles ont été repiquées 3 fois suragar au BG11
pour les séparer des algues unicellulaires Eucaryotes.
On peut se procurer deux espèces de Cyanobactéries de
l’Institut Pasteur auprès du CNCM (Collection Nationale de Microorganismes)
CNCM
25 rue du Docteur Roux
75724 PARIS Cedex 15
Chaque souche coûte 130 F HT plus les frais
de port.
Synechocystis PCC 6701
Cyanobactérie unicellulaire de l’ordre des Chroococcales
qui présente une adaptation chromatique.
Cultivée en milieu liquide (BG11) sous un cache
plastique rouge (une chemise plastique ou une couverture de protège-cahier plastique), elle ne produit pas de phycoérythrine rouge et elle paraît verte. Sous
un cache plastique vert, elle produit en abondance de la phycoérythrine et apparaît alors rouge violacée sombre. La différence
de couleur devient très évidente en une dizaine de jours. Ce phénomène s’explique par l’induction de la production de la phycoérythrine.
Cylindrospermum PCC 7604
Cyanobactérie filamenteuse de l’ordre des Nostocales. Elle présente la particularité de
pouvoir différencier en plus des cellules bactériennes chlorophylliennes,deux types de cellules spécialisées : les akinètes et les hétérocystes.
Les akinètes sont des cellules spécialisées quiescentes à paroi épaisse résistantes
à la dessiccation qui germent pour former de nouveaux filaments. Les hétérocystes sont des cellules à paroi épaissie ayant perdu leurs phycobilisomes et leur photosystème II qui synthétisent une nitrogénase fixant l’azote atmosphérique. on induit la formation de ces hélérocysles en cultivant la souche dans un milieu sans azote (BGI1-0)
Le milieu
Elles poussent sur un milieu minéral
| Composition pour 1 litre d’eau distillée : | |
|---|---|
| 1-nitrate de sodium (Na NO3) | 1,5g |
| 2-monohydrogénophosphate de potassium, K2HPO4 | 31 mg |
| 3-sulfate de magnesium heptahydraté, Mg SO4, 7 H20 | 75mg |
| 4-Chlorure de calcium dihydraté, Ca Cl2, 2H2O | 36 mg |
| 5-acide citrique monohydraté | 7 mg |
| 6-EDTA disodique | 1mg |
| 7-carbonate de sodium, Na2CO3 | 20 mg |
| 8-citrate de fer ammoniacal | 6 mg |
| 9-y ajouter 1ml de mélange "métaux" | 1mL |
mélange "métaux" :
| Composition pour 250 mL d’eau distillée : | |
|---|---|
| 1- H3 Bo4 | 715 mg |
| 2-Mn Cl2, 4 H2O | 452 mg |
| 3-Zn SO4, 7 H2O | 56 mg |
| 4-Na2 Mo O4, 2H2O | 97 mg |
| 5-Cu SO4, 5 H2O | 20 mg |
| 6- Co(NO3)2, 6 H2O | 12,5 mg |
on peut élever les cyanobactéries sur
milieu gélosé, ajouter alors 7g d’Agar par litre de milieu
Stériliser le milieu 20 minutes à 130°C
On trouve ce milieu tout prêt chez :
SIGMA
L’lsle d’Abeau Chesnes -BP 701
38297-SAINT QUENTIN FALLAVIER CEDEX TELECOPIE : 04 74 95 68 08
Référence C 3061 : Cyanobacteria BG 11 freschwater ..... 50F HT les 100ml .
la solution vendue est concentrée 50X, (on met donc 20 ml
de solution dans 980 ml d’eau distillée)
ce qui met le litre de BG11 à 10FHT
Les contenants
On peut les installer dans des tubes à essai stériles
pour culture in vitro, dans un erlenmeyer stérile bouché par un tampon de gaze recouvert
d’un papier d’aluminium, des petits pots de bébé stériles à couvercles transparents
autoclavables, etc.
Tous les récipients stérilisables et transparents conviennent.
Ne pas mettre trop de liquide afin d’assurer une bonne aération du milieu, utiliser dans
ce même objectif des fermetures ventilées.
L’éclairement
Elles ont impérativement besoin de lumière, mais celle-ci
ne doit pas être trop forte.
En plein soleil devant une fenêtre est une méthode quasi certaine pour les détruire.
Par contre, leur installation sous un néon horticole 24 heures sur 24 leur convient très
bien.
Si la lumière est un peu forte, on peut la tempérer avec un papier sulfurisé posé par
dessus les cultures.
Elles prolifèrent bien à la température normale d’une pièce.
La conduite des cultures
Les souches sont repiquées tous les 3 à 6 mois selon les
variétés.
Elles prolifèrent assez lentement :
II faut compter 5 à 6 semaines pour obtenir un bon développement du repiquage.
