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Sciences de la vie et de la Terre

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Niveaux : 2nde, 1eS, Terminale S, MISVT, CPGE
Types d'activité pédagogique : Usage d’un E.N.T., Évaluations expérimentales, Matériel - fabrication, Observation, Travaux d’élèves, Travaux pratiques, Dossier

[Sc.Exp : Thèmes d’étude] - Coloration des levures

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Descriptif

Techniques de coloration des levures pour observation au microscope.

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Toutes les observations seront réalisées au microscope au plus fort grossissement disponible, si posible à l’immersion dans l’huile.

Observation de cellules vivantes

Sans coloration

  • On peut observer la brillance de la paroi squelettique et quelques fois des vacuoles.

Coloration au rouge neutre

  • Prélever au cure-dents une colonie que l’on place dans le colorant, puis dissocier les cellules.
  • Déposer une goutte de colorant sur une lame et laisser agir 20 minutes.
  • Recouvrir avec une lamelle.
  • Les vacuoles apparaissent en rose foncé puis la coloration va diffuser dans le cytoplasme.

Coloration de frottis fixés

Préparation d’ un frottis

  • Diluer à l’extrémité d’une lame, dans une goutte de tampon phosphate (pH 6,2), plusieurs colonies de levures prélevées sur une gélose.
  • Avec une lamelle, étaler cette goutte en un film continu à la surface de la lame.
  • Laisser sécher à l’air ou à l’étuve (27 °C maximum).

Coloration à l’eau iodée

  • Déposer une goutte d’eau iodée sur le frottis et recouvrir avec une lamelle.
  • Le glycogène synthètisé dans le cytoplasme apparait en jaune.

** Coloration au bleu de méthylène

  • Recouvrir le frottis de bleu de méthylène et laisser agir 30 minutes.
  • Tremper la lame dans une solution d’acide chlorhydrique à 0,05 mole.L<SUP>-1SUP> pendant 1 à 2 minutes.
  • Rincer à l’eau distillée et recouvrir d’une lamelle.
  • On peut observer les réserves de phosphate dans les vacuoles et les noyaux.

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