Culture de levures
- milieu de culture : Milieu de Sabouraud ou minimum pour levures, voir les détails
- sucres : glucose ou autres sucres à 300 mmol.L
- levures fraîches : 1 à 10 g.L-1.
Etude de la respiration
Principe de la respiration
Préparation des composants :
- sucres : glucose 0,55 mmol.L-1,
- tampon phosphate 65 mmol.L-1 pH 6,2,
- levures fraîches :10 g.L-1.
Protocole :
- Mettre les levures dans du tampon pendant 24 h avec un « bulleur » ( ou aérateur) d’aquarium.
- Ce jeûne est nécessaire pour éliminer les réserves énergétiques des levures (glycogène).
- Le jour de la manipulation, centrifuger le milieu, laver les levures, recentrifuger.
- Les levures récupérées peuvent alors être placées dans le milieu choisi.
Respiration des levures pour EXAO
Détails de mesure de la respiration par EXAO
voir Mesure de la respiration par exao
protocole :
- Placer les levures :10 g.L-1 (fraîches) ou 2,5 g.L-1 (lyophilisées) dans un certain volume de tampon phosphate 65 mmol.L-1 pH 6,2.
- Oxygéner le milieu à l’aide d’un bulleur pendant 2 h puis centrifuger.
- Rajouter le même volume d’eau distillée, agiter vigoureusement avec un barreau aimanté et laisser buller à nouveau.
- Centrifuger,laver.
- Prélever le volume nécessaire pour remplir le réacteur. Ajouter le substrat nutritif, par exemple du glucose.
Etude de la fermentation
préparation
- si mesures avec un microrespiromètre (voir Mesure des échanges gazeux avec un microrespiromètre), préparer une suspension avec 50 mL de levures à 10 g.L-1 sinon la préparer avec 50 g.L-1 de levures.
- tampon phosphate 65 mmol.L-1 pH 6,2,
- 50 mL de glucose ou d’un autre sucre à 20 mmol.L-1. La concentration du sucre peut varier de 5 à 500 mmol.L-1
Il est utile de laisser les levures en agitation douce pendant 30 minutes dans le milieu afin qu’elles éliminent le dioxygène dissous et qu’il n’y ait pas d’interférence entre la respiration et la fermentation.
