Sciences de la vie et de la Terre

Localisation et extraction de l’ADN dans les cellules d’oignon (Fiche Labo)

01 / 01 / 2000 | Denis Rebout | Migration

Technique mise au point par M Béranger à l’école de l’ADN de
Nîmes

 I Localisation de l’ADN dans les cellules d’oignon.

  1. Prélever à l’aide d’une pince fine de l’épiderme d’oignon.
  2. Déposer ce fragment dans une verre de montre avec du vert de méthyle (colorant spécifique de l’ADN). Laisser agir 2 minutes.
  3. Rincer dans un autre verre de montre avec de l’eau distillée.
  4. Déposer entre lame et lamelle.
  5. Observer et dessiner une cellule.

L’ADN coloré en vert par le vert de
méthyle se trouve dans les noyaux des cellules.

 II Extraction de l’ADN des cellules d’oignon

Toutes les réactions doivent se
passer au froid ou avec des objets froids pour limiter l’hydrolyse de l’ADN.

  1. Broyer grossièrement (ne pas faire une purée fine) 2 oignons froids au mixer (paillasse du professeur).
    • On peut faire observer le broyat avec du vert de méthyle pour voir l’action du broyage.
    • On peut aussi poursuivre par une centrifugation si on possède une centrifugeuse.
  2. Dissoudre dans une tasse à café (10 cl) une cuillère à café de sel et rajouter cette eau salée au broyat. L’eau salée augmente la dissolution de l’ADN.
  3. Rajouter quelques gouttes de liquide vaisselle qui va dissoudre les membranes. Remixer 2 à 3 fois l’ensemble pour bien mélanger.
  4. Filtrer sur de la gaze au dessus de petits pots ou bécher.
  5. Ajouter le même volume d’éthanol froid conservé au réfrigérateur en prenant soin de verser sur le bord pour ne pas mélanger les 2 phases.
  6. On observe alors à l’interphase précipiter au bout de quelques minutes des filaments blancs que l’on peut récupérer avec une pipette ou un agitateur.
  7. Mettre ces filaments dans du vert de méthyle et observer.

On peut extraire de l’ADN des cellules en
les faisant éclater et en dissolvant les membranes.

 

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