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Sciences de la vie et de la Terre

Localisation et extraction de l’ADN dans les cellules d’oignon (Fiche Labo)

01 / 01 / 2000 | Denis Rebout | Sacha Touille

Technique mise au point par M Béranger à l’école de l’ADN de
Nîmes

I Localisation de l’ADN dans les cellules d’oignon.

  1. Prélever à l’aide d’une pince fine
    de l’épiderme d’oignon.
  2. Déposer ce fragment dans une verre de
    montre avec du vert de méthyle (colorant spécifique de l’ADN). Laisser agir 2 minutes.
  3. Rincer dans un autre verre de montre
    avec de l’eau distillée.
  4. Déposer entre lame et lamelle.
  5. Observer et dessiner une cellule.

L’ADN coloré en vert par le vert de
méthyle se trouve dans les noyaux des cellules.

II Extraction de l’ADN des cellules d’oignon

Toutes les réactions doivent se
passer au froid ou avec des objets froids pour limiter l’hydrolyse de l’ADN.

  1. Broyer
    grossièrement (ne pas faire une purée fine) 2 oignons froids au mixer (paillasse du
    professeur).
    • On peut faire observer le broyat avec du vert de méthyle pour voir l’action du broyage.
    • On peut aussi poursuivre par une centrifugation si on possède une
      centrifugeuse.
  2. Dissoudre
    dans une tasse à café (10 cl) une cuillère à café de sel et rajouter cette eau salée
    au broyat. L’eau salée augmente la dissolution de l’ADN.
  3. Rajouter
    quelques gouttes de liquide vaisselle qui va dissoudre les membranes. Remixer 2 à 3 fois
    l’ensemble pour bien mélanger.
  4. Filtrer sur
    de la gaze au dessus de petits pots ou bécher.
  5. Ajouter le
    même volume d’éthanol froid conservé au réfrigérateur en prenant soin de verser sur
    le bord pour ne pas mélanger les 2 phases.
  6. On observe
    alors à l’interphase précipiter au bout de quelques minutes des filaments blancs que
    l’on peut récupérer avec une pipette ou un agitateur.
  7. Mettre ces
    filaments dans du vert de méthyle et observer.

On peut extraire de l’ADN des cellules en
les faisant éclater et en dissolvant les membranes.

 

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